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奶牛的卵移植

2011-10-13 10:50| 发布者: admin| 查看: 3071| 评论: 0|来自: 中华牛网

摘要: “卵移”是胚胎或受精卵移植的简称。其特点是从优秀母牛(供体)取出受精卵,经过冷冻保存、运送,再给其它乳牛(受体)移植到子宫角或输卵管内,使其发育并分娩。该犊牛具有与供体母牛相似的特性。因此,它对充分发挥优 ...

 
 “卵移”是胚胎或受精卵移植的简称。其特点是从优秀母牛(供体)取出受精卵,经过冷冻保存、运送,再给其它乳牛(受体)移植到子宫角或输卵管内,使其发育并分娩。该犊牛具有与供体母牛相似的特性。因此,它对充分发挥优良母牛的繁殖潜力,推广利用优良雌性配子,加速畜群改良等,都有极其重要的实际生产价值,在动物遗传学和繁殖生理学的研究中也具有重要作用。
  卵移的过程中包括超数排卵、胚胎的采集、胚胎的保存和胚胎移植。

(一)超数排卵
也称“超排”。指将供体母牛经激素处理,使其发情、并能排出数量较多的发育成熟的卵子,经合理的人工授精方法,以获得数量稳定的可移植的胚胎。
  处理方法:母牛发情后9—13天开始肌肉注射促卵泡素(FSH),每次剂量为50IU,每天两次,每次间隔12h,连续注射4天,共8次。在首次注射促卵泡素(FSH)后的48h、60h和72h,分别肌肉注射氯前列烯醇O.2mg。经观察,母牛在首次用氯前列烯醇后的30--60h相继出现发情。
  超排处理时间和激素使用不尽相同,有的在性周期第16天,肌肉注射孕马血清2 500IU,在20--21天时静脉注射绒毛膜促性腺激素(HCG)2000IU;有的在性周期第8-14天,肌肉注射孕马血清2000IU,48h后用前列腺素F2a33mg,一次肌肉注射。
  超排数目与激素剂量有关,剂量过大,排卵数过多,易损伤卵巢功能。通常,以每次母牛排卵10个左右为宜;当排卵数在11—21个时,可使受精率、回收率和受胎率下降。
  对经超排处理的母牛,应认真观察母牛的发情表现,每天应观察2-3次,由于牛群中出现较多的相互爬跨母牛,为确保准确,可用开膣器检查,当子宫颈口充分开张,并有适量粘液流出即为发情。当母牛接受其它牛爬跨时开始推算人工授精时间。
  超排母牛的人工授精时间和授精次数报道不一,有在超排母牛发情后的12h或24h授精的,有在用氯前列烯醇处理后的48h授精的。关于授精次数上,有1次输精的,有3次(8h、16h,24h)输精的,一般认为,超排母牛增加人工授精次数可以提高母牛超排卵子的受精率。
  (二)胚胎采集
  也称为“采卵”。通常胚胎采集的时间是母牛发情后3~7天。胚胎收集的方法有手术和非外科手术法两种。其中非外科采集法已普遍采用。多用德式二路采卵管非手术采集胚胎。
  操作方法:母牛站立保定。局部麻醉或用低剂量的全身麻醉药使其安静。掏出直肠内的蓄积的粪便。用0.1%新洁尔灭液充分、彻底洗洁母牛后躯,再用75%酒精擦拭阴门。在二路采卵管内插入不锈钢内芯使之挺直,将挺直的采卵管导入阴道达阴道穹窿,另一只手在直肠内协助。慢慢将导管插入子宫体,到子宫角内5cm左右,拔出采卵管内的内芯约2cm,再使采卵管沿子宫角弯曲方向进入子宫角深部。在这一过程中,助手每抽出约2cm的内芯,术者将采卵管向子宫内送入相应的长度,直到将采卵管送到子宫角适当的位置。采卵管中的一路为“气路”,即通过它向气球内充气;另一路为“水路”。即向子宫内灌注和回收冲卵液。充气后的气球可将子宫角固定于子宫角大弯附近。此时,将采卵管内的不锈钢内芯全部抽出,用50ml注射器将20--30ml冲卵液通过采卵管注入子宫角,再将冲卵液吸入到注射器内。冲卵液由20ml逐渐增加到50ml,每侧子宫角共用冲卵液500ml。回收的冲卵液轻轻注入到500ml的集卵杯内,静置30min,徐徐吸去上部液体,将剩余的30ml冲卵液分别置于多个直径为10cm的平皿中,在显微镜下逐个检查,已检查出的胚胎将其移入到培养液中保存。
  (三)胚胎保存
  冲卵液和胚胎培养液通用。较为适用的是含灭活犊血清磷酸缓冲液(pbs)。其成分:氯化钠8g,氯化钾2g,磷酸氢二钠1.15g,磷酸二氢钾0.2g,氯化钙O.1g,氯化镁0.1g,丙酮酸钠32mg,葡萄糖1g,牛血清白蛋白4g,卡那霉素25mg,酚红5mg,三蒸馏水1000ml。犊牛血清20%,pH7.2,-20℃保存。
  (四)移植技术
  移植技术有外科方法和非外科方法两种。现普遍应用的是非外科移植。冲出来的胚胎首先应采用形态学观察和体外培养相结合的方法进行质量评定,最后才能确定其是否为可移植胚胎。
  形态学观察在实体显微镜下进行,放大80倍。可移植胚胎的标准是胚胎发育与采集日期一致;形态典型,透明带完整或损伤轻微;胚胎结构清楚,或缺陷轻微;细胞突出胚胎整体部分或色泽发暗部分不超过胚胎总体积的1/5。体外培养:将色泽发暗比例过大或细胞突出胚胎整体过多的胚胎置于37℃培养2—4h,若其发育者为可移植胚。将以PBS培养的胚胎按直肠把握子宫颈输精法,将其注入子宫角深处即可。


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