头孢噻呋等抗菌20药物对4种标准菌株的药效学研究

头孢噻呋等抗菌20药物对4种标准菌株的药效学研究

王付民, 胡功政, 高延玲

（河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002）

摘 要：通过用头孢噻呋等抗菌药物对兽医临床常见的4种标准菌株的体外抗菌活性的研究，表明头孢噻呋等对4种标准菌株的抗菌活性较强；头孢噻呋等对4种标准菌株的杀菌速率均较大；与氨苄西林相比，头孢噻呋的各个浓度（8，5，2 MIC）对金黄色葡萄球菌、猪链球菌的杀菌速率较小，即它们在3 h内使活菌减少的值差异显著（P<0.05），但头孢噻呋的各个浓度（8，5，2 MIC）对鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌的杀菌速率均大于氨苄西林的各个浓度；头孢噻呋与头孢曲松的各个浓度相比较，对4种标准菌株的杀菌速率差异均不显著（P>0.05）；头孢噻呋等3种β内酰胺类抗生素对4种菌株的杀菌速率均不随浓度（8，5，2 MIC）的增加而增大（P>0.05），即它们均为非浓度依赖性的杀菌药物。?

关键词： 头孢噻呋;4种标准菌株;抗菌活性;杀菌曲线。?

头孢噻呋（Ceftiofur）作为第一个动物专用的第3代头孢菌素类抗生素，其抗菌谱广、抗菌活性强，国外应用较早并对其药效学及药动学进行了大量研究^[1-3]，但在国内尚未见对该药的体外抗菌活性、杀菌动力学曲线方面的系统研究。随着我国的仿制成功和批准生产，该药在国内的应用必将日趋广泛。因此，结合我国兽医临床常见病原菌进行头孢噻呋的药效学研究，对其更为合理的防治畜禽细菌性疾病，显得尤为重要。?

1 材料与方法?

1.1.1 药品 头孢噻呋原粉：美国法玛西亚普强公司生产，纯度为95.8%，批号为020406；头孢曲松原粉：广州白云山制药总厂生产，纯度为94.8%，批号为010860；氨苄西林原粉：河北远征药业有限公司生产，纯度为85%，批号为002405。?

1.1.2 试剂 营养肉汤培养基，杭州天河微生物试剂有限公司生产；麦康凯营养琼脂，杭州天河微生物试剂有限公司生产；SS营养琼脂，杭州天河微生物试剂有限公司生产；血琼脂平板，郑州博赛生物技术研究所生产；卵黄高盐琼脂，杭州天河微生物试剂有限公司生产。1.13 仪器 SW-CJ-JC型超静工作台，苏静集团苏州安泰空气技术有限公司；全自动电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司生产。?

1.1.4 鸡大肠杆菌O₇₈、鸡白痢沙门氏菌C_79-13、金黄色葡萄球菌C₅₆₀₀₀、猪兽疫链球菌C?₅₅₁₃₈菌种，均来源于中国兽医药品监察所。?

1.2.1 菌种的启封与培养 取各细菌冻干标准菌株管，无菌启封后分别接种于营养肉汤（猪链球菌使用50 mL/L小牛血清的营养肉汤）中，于37 ℃培养12 h，然后触片、革兰氏染色、镜检，同时进行平板划线，观察各菌的菌落形态。鸡大肠杆菌在镜下为小的杆状的G^-细菌，麦康凯营养琼脂平板上为紫红色的直径约1 mm左右的圆形小菌落；鸡白痢沙门氏菌在镜下为小的杆状的G^-细菌，SS营养琼脂平板上为无色的针尖状的小菌落；猪链球菌在镜下为链状或单个存在的G⁺球菌，在血琼脂平板上呈β型溶血；金黄色葡萄球菌在镜下为葡萄状的G⁺球菌，在普通营养琼脂平板上为金黄色的圆形菌落，在卵黄高盐琼脂上为黑色菌落。培养时分别钩取平板上1个～2个菌落接种于营养肉汤中，37 ℃培养18 h～24 h后，4 ℃冰?箱保存。

1.2.2 药液配制 体外抑菌试验的药液配制。无菌准确称取适量的各种药物，用无菌蒸馏?

配制成浓度为1 280 mg/L的药液100 mL，均为使用前配制；测杀菌动力学曲线的药液配制。如上述方法配制800,500，200 MIC的各种药液。?

1.2.3 体外抑菌试验 采用试管两倍稀释法，细菌浊度为10⁵ cfu/mL，以37 ℃培养18 h～24 h后能抑制细菌生长的最小药物浓度为最小抑制浓度（MIC），继续培养到48 h能抑制细菌生长的最小药物浓度为最小杀菌浓度（MBC）。相同过程重复3次，求平均值^[4]。?

1.2.4 细菌计数 用9 g/L的无菌生理盐水作为细菌记数的稀释液，对菌液进行10倍比系列稀释后，取10⁴～10⁸的稀释度的稀释液0.1 mL置于平板上均匀涂布，每个稀释度2个～3个平板，在37 ℃培养18 h～24 h后，对细菌数在30个～300个的平板进行计数，求平均值，以cfu/mL为单位。?

1.2.5 对数生长期细菌悬液的制作 将菌种接种于新鲜的营养肉汤中，37 ℃培养18 h～24 h，然后划线，与 37 ℃ 培养18 h～24 h，取平板上1个～2个菌落接种于营养肉汤中，37 ℃培养8 h～10 h，使活菌数在10⁸ cfu/mL，使用时根据需要以37 ℃预温的营养肉汤稀释到所需的浊度。?

1.2.6 杀菌动力学曲线的测定 取0.1 mL的800,500，200 MIC的各种药液0.1 mL，分别加入8.9 mL的37 ℃预温的营养肉汤中，混匀后取10⁸cfu/mL对数生长期细菌悬液1 mL加入该肉汤中，立即置37 ℃恒温水浴培养，然后分别于0,0.5,1,1.5,2,3,4,5,6 h和8 h取0.1 mL的菌液进行细菌计数。相同过程重复3次，求平均值。将细菌计数所取的各个时间点cfu/mL值取常用对数(log₁₀)以其为纵轴，以孵育时间为横轴建立各抗菌药物在不同浓度、对不同细菌的杀菌动力学曲线，并比较不同细菌在不同药物及不同药物浓度中3 h内细菌减少的数目的对数值，了解各药物在不同浓度的杀菌活性与杀菌速率。?

2 结果?

头孢噻呋、头孢曲松、氨苄西林对4种标准菌株的抗菌活性（表1）。头孢噻呋对4种标准菌株均有较强的抗菌活性，头孢噻呋对鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌的抗菌活性强于氨苄西林，但弱于头孢曲松；对金黄色葡萄球菌、猪链球菌的抗菌活性弱于氨苄西林，但强于头孢曲松。

表1 头孢噻呋等对4种标准菌株的抗菌活性?

Table 1 Antimicrobial activity of ceftiofur and other antibiotics tested against four standard strainsmg/L?