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新疆某地牛病毒性腹泻病毒生物型的鉴定

2010-7-29 01:50| 发布者: admin| 查看: 1640| 评论: 0

摘要: 摘 要:从临床怀疑为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染奶牛的血液中用RT-PCR方法检测BVDV,目的片断回收克隆测序,经Blast分析,与匈牙利疫苗致弱株同源性99﹪,并用PCR方法鉴定基因型,均为BVDV-Ⅰ型。用MDBK细胞鉴定生物 ...

 

摘 要:从临床怀疑为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染奶牛的血液中用RT-PCR方法检测BVDV,目的片断回收克隆测序,经Blast分析,与匈牙利疫苗致弱株同源性99﹪,并用PCR方法鉴定基因型,均为BVDV-Ⅰ型。用MDBK细胞鉴定生物型,不致细胞病变,为非致细胞病变(nCP)型。

关键词:牛病毒性腹泻病毒;非致细胞病变

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virusBVDV)属于黄病毒科瘟病毒属(Pestivirus)[1],是牛、羊等重要经济动物腹泻的重要病原。自20世纪80年代初在我国首次发现该病并分离到病原以来,已有16个省市自治区查出该病的抗体并分离到病原。王治才等(1992)对新疆七个地区的羔羊腹泻做了BVDV感染调查,平均阳性率为73.6%[2]BVDV已在我国普遍存在,造成重大经济损失,严重影响我国畜牧业的发展。

目前我国没有建立对BVDV有效的预防方法,没有任何疫苗。该病在养牛业发达国家普遍存在,虽然有疫苗,但是存在安全性问题,效果不理想。现对BVDV的分类主要有基因型和生物型两种:基因型根据5′UTR碱基的不同分为型;生物型根据是否致细胞病变分为致细胞病变(cell pathologicalCP)和非致细胞病变(nCP)型。该病控制的难点在于持续感染,若母牛在妊娠期间感染BVDV,或本身带毒,则产下成活犊牛为持续感染牛,它不产生抗体,但终生带毒排毒。若持续感染牛感染异源BVDV,则发生严重腹泻,病死率几乎100%,给养牛业造成的损失巨大。

1 材料与方法

1.1 病料

采自新疆某地区牛全血,0.1%DEPC水配制的2%EDTA抗凝。

1.2 标准毒株及细胞

NADLMDBK细胞购自中监所。

1.3 菌株与载体

E.coli DH5α由本新疆农垦科学院基因工程实验室保存;载体pMD18-T购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.4 主要试剂

琼脂糖、RT-PCR试剂盒、胶回收试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司;DNA Marker购自上海生工生物工程技术服务有限公司;Tizol购自Invitrizol公司。

1.5 引物

根据标准毒株NADL5′-UTR保守区设计[3-4],由上海生工生物工程技术服务有限公司合成(1) 

1 引物序列及位置

Table 1 Sequence and  position of  primers


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