新疆某地牛病毒性腹泻病毒生物型的鉴定

关键词：牛病毒性腹泻病毒；非致细胞病变

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus，BVDV)属于黄病毒科瘟病毒属(Pestivirus)^[1]，是牛、羊等重要经济动物腹泻的重要病原。自20世纪80年代初在我国首次发现该病并分离到病原以来，已有16个省市自治区查出该病的抗体并分离到病原。王治才等(1992)对新疆七个地区的羔羊腹泻做了BVDV感染调查，平均阳性率为73.6%^[2]。BVDV已在我国普遍存在，造成重大经济损失，严重影响我国畜牧业的发展。

目前我国没有建立对BVDV有效的预防方法，没有任何疫苗。该病在养牛业发达国家普遍存在，虽然有疫苗，但是存在安全性问题，效果不理想。现对BVDV的分类主要有基因型和生物型两种：基因型根据5′UTR碱基的不同分为Ⅰ和Ⅱ型；生物型根据是否致细胞病变分为致细胞病变(cell pathological，CP)和非致细胞病变(nCP)型。该病控制的难点在于持续感染，若母牛在妊娠期间感染BVDV，或本身带毒，则产下成活犊牛为持续感染牛，它不产生抗体，但终生带毒排毒。若持续感染牛感染异源BVDV，则发生严重腹泻，病死率几乎100%，给养牛业造成的损失巨大。

1　材料与方法

1.1　病料

采自新疆某地区牛全血，0.1%DEPC水配制的2%EDTA抗凝。

1.2　标准毒株及细胞

NADL和MDBK细胞购自中监所。

1.3　菌株与载体

E.coli DH5α由本新疆农垦科学院基因工程实验室保存；载体pMD18-T购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.4　主要试剂

琼脂糖、RT-PCR试剂盒、胶回收试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司；DNA Marker购自上海生工生物工程技术服务有限公司；Tizol购自Invitrizol公司。

1.5　引物

根据标准毒株NADL的5′-UTR保守区设计^[3-4]，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成(表1)。 

表1　引物序列及位置

Table 1　Sequence and  position of  primers