奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

(1.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳 550025；2.贵州大学动物疫病研究所，贵州贵阳 550025)

摘　要：为了解贵阳市某乳业有限公司奶牛场隐性乳房炎流行情况及其主要病原菌，采用CMT方法检出隐性乳房炎乳样后，对阳性乳样进行细菌分离与鉴定，同时对其主要病原菌进行了体外药敏试验。结果表明，该公司奶牛场隐性乳房炎的感染率为40%，主要病原菌为葡萄球菌属和链球菌属细菌，其敏感的抗菌药物有先锋V霉素、利福平、丙氟哌酸、氟哌酸、新霉素、卡那霉素、庆大霉素等，经临床用药观察，有效地控制了该公司奶牛场隐性乳房炎。

关键词：奶牛；隐性乳房炎；细菌；鉴定；药敏试验 

奶牛乳房炎是指奶牛的乳房受到了物理、化学、微生物等因素刺激所引起的一种炎症，表现为乳汁发生理化性质和细胞学性质的变化、乳腺组织发生病理学变化等。该病是奶牛的常发病之一，可引起奶牛产奶量下降、奶品质降低、奶牛过早淘汰等^[1-2]。发病奶牛的乳汁含有病原微生物及其毒素、经治疗后的残留药物等，对人类健康危害极大^[3]。目前已知的奶牛乳房炎的致病性微生物已超过150种，其中包括球菌、杆菌、支原体、真菌、酵母菌和病毒等。大部分是由细菌感染引起的，主要由革兰氏阳性菌(如无乳链球菌、金黄色葡萄球菌)引起，规模化养殖场中革兰氏阴性菌(大肠埃希菌)感染也很普遍^[4]。

本试验对贵阳市某公司的几个奶牛场进行了隐性乳房炎普查、病原细菌分离鉴定和主要病原菌药敏试验，以期对该公司奶牛隐性乳房炎的防控提供理论依据。

1　材料与方法

1.1　试验材料

CMT检测试剂由贵州大学动物科学学院预防兽医学专业实验室提供；鲜血营养琼脂培养基、普通营养琼脂培养基、却甫曼琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、细菌生化微量鉴定管和药敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司。

1.2　隐性乳房炎的普查

用CMT检测试剂对贵阳市某乳业有限公司2个奶牛场的1 550头泌乳奶牛进行隐性乳房炎普查。收集奶样时，先用高锰酸钾清洗乳房，弃去头2把～3把奶，然后以无菌操作方法挤下约8 mL～10 mL奶样于灭菌试管中。无菌取出2 mL～4 mL奶样进行CMT检测，阳性乳样标明牛号和日期后，随即带回实验室进行病原菌的分离鉴定。

1.3　病原菌的分离鉴定

将隐性乳房炎阳性乳样摇匀后，无菌取适量的试管中部乳样，涂布于鲜血平板琼脂上，37 ℃培养24 h～48 h，观察细菌的生长情况及其菌落特征。对不同形态的菌落进行挑菌纯培养后，涂片染色镜检。根据菌体形态和染色特性，初步判定细菌类属，然后分别进行培养特性和生理生化鉴定，如判定为葡萄球菌的需进行兔血浆凝固酶试验、过氧化氢酶试验、三糖铁试验、0/F试验等；如判定为链球菌的则需进行CAMP试验、溶血试验、七叶苷水解试验、美蓝牛乳试验、甘露醇、山梨醇、血清菊糖发酵试验等；判定为革蓝氏阴性杆菌的进行尿素酶试验、糖类发酵试验、枸橼酸盐利用试验、明胶液化试验等。

1.4　主要病原菌的药敏试验

采用药敏纸片琼脂扩散法对主要病原菌进行药物敏感性试验，即将分离鉴定的主要病原菌分别均匀涂布于鲜血琼脂平板上，然后贴药敏纸片于其上，置37 ℃培养24 h～48 h，测量抑菌圈直径，进行抑菌效果判定。

2　结果

2.1　奶牛感染隐性乳房炎情况

该公司2个奶牛场共有奶牛2 500头，其中泌乳奶牛1 550头，采用CMT检测试剂对其乳样进行隐性乳房炎的排查，结果显示阳性乳样620份(头)，阳性率为40%。

2.2　隐性乳房炎细菌分离鉴定结果

随机选取隐性乳房炎阳性乳样70份，涂布在鲜血营养琼脂平板上，37 ℃培养24 h～48 h后，结果每份乳样均有细菌菌落的存在，细菌检出率为100%。在琼脂平板上主要有3种不同的菌落：第1种是圆形光滑、湿润、边缘整齐、黄色或乳白色、中等大小的菌落，数量较多；第2种菌落与第1种特征类似，但呈现明显的β溶血现象；第3种为圆形、光滑，边缘整齐、灰白色、透明的小菌落。将上述微生物纯培养后，进行染色特性、培养特征和生化鉴定，结果见表1。 

表1　隐性乳房炎病原菌的分离鉴定结果

Table 1　The isolation and identification results of pathogens in the cows with latent mastitis