盐酸环丙沙星在子宫内膜炎奶牛乳腺排泄的研究

（1.宁夏大学农学院，宁夏银川 750021;2.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070；3.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050） 

摘　要：通过子宫内灌注盐酸环丙沙星，采用内标法以反相高效液相色谱法测定了4头患子宫内膜炎的奶牛乳汁中盐酸环丙沙星的药物浓度。研究表明，在奶牛给药后0 h～24 h，血药浓度大于乳药浓度，在24 h后，乳药浓度大于血药浓度。在48 h内盐酸环丙沙星的乳药浓度值均高于MIC值，所以仍具有抑菌作用，这对乳房炎的治疗具有重要意义。

关键词：盐酸环丙沙星；奶牛；子宫内膜炎；乳腺排泄 

盐酸环丙沙星为第三代喹诺酮类抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强、吸收完全、副作用小等特点。国内已广泛用于临床，抗感染效果良好^[1]。国内外对环丙沙星在动物体内的排泄研究已有很多^[2­6]。但在患子宫内膜炎奶牛的应用及其乳腺排泄情况尚未见有报道。本文旨在探讨该药在患子宫内膜炎奶牛乳腺排泄的情况，为患子宫内膜炎奶牛子宫用药后乳腺排泄情况提供参考资料，同时为该药在患乳房炎或子宫内膜炎并发乳房炎时的用药提供理论依据。

1　材料与方法

1.1　仪器

美国Waters 510高效液相色谱仪，Waters 510型输液泵，474型可调波长荧光检测器，U6K型进样阀，AST型数据处理仪。

1.2　药品和试剂

盐酸环丙沙星标准品，含量99.06%。二氟沙星标准品，含量99.56%。乙腈，色谱纯，四丁基溴化铵，甲醇，85%磷酸为分析纯，双蒸水为兰州生物所细胞培养室提供。

1.3　盐酸环丙沙星标准液

配制0.2 mg/mL的盐酸环丙沙星标准液，0.5 mg/mL的二氟沙星标准液。临用前再按要求用双蒸水配成系列标准浓度。

1.4　试验用动物

处于发情期的4头患子宫内膜炎的奶牛，由兰州市段家滩奶牛场提供。在试验前均未给任何药物。

1.5　动物给药及采样

给药前4头奶牛用改装的输精器分别子宫灌注250 mL的生理盐水冲洗子宫3次，再灌注25 mg/mL的盐酸环丙沙星100 mL。给药前采一定量的空白乳样。分别于给药后8、24、32、48、56、60、72、80、96、104、120、128、144 h采乳样。每次采乳量5 mL于离心管中，加入5 mL的乳蛋白沉淀剂(甲醇∶850 mg/L，磷酸为6∶1)，用旋涡混合器摇匀。3 000 r/min离心10 min。弃上层脂肪层，吸取上清液3 mL；给药后分别于8 h和24 h采血，除去蛋白，加内标处理，置－4 ℃冰箱保存至测定。

1.6　样品预处理

取离心管加入1 mL浓度为0.5 mg/L的二氟沙星标准液，置于50 ℃的水浴锅中用氮气吹干。将乳样于室温中摇匀，取乳清1 mL加入该试管中。经针头式过滤器过滤。吸取20 μL样品，进行HPLC分析。

取离心管，加入1 mL浓度为0.5 mg/L的二氟沙星标准液，用氮气吹干。血浆于室温中自然解冻，摇匀后取1 mL加入该试管中，再加入2 mL甲醇，用旋涡混合器混合2 min。以3 000 r/min离心10 min。取上清液1 mL置入另一试管中，氮气吹干。加入200 μL流动相，混溶后，经针头式过滤器过滤。吸取20 μL样品，进行HPLC分析。

1.7　检测方法

样品中盐酸环丙沙星采用HPLC内标法，内标物为二氟沙星。固定相：色谱柱ODS­1，测定流动相，0.015 mol/L四丁基溴化铵溶液乙腈(92∶8)，以85%的磷酸调pH为3.0。检测器为WATERS荧光检测器。柱温30 ℃，流速1.0 mL/min，进样量20 μL。保留时间：盐酸环丙沙星为9.48 min～11.25 min；二氟沙星为19.79 min～20.73 min。检测波长：λ_ex为278 nm， λ_em为465 nm。

1.8　数据处理

测定乳汁中盐酸环丙沙星浓度(Y_t)，计算以下各值：△D_t为采样间隔内排泄的药物量，△Dt＝ Y_t×采样间隔内乳汁的质量^[7­8]。

2　结果

2.1　乳汁标准曲线和线性范围

 空白乳汁中添加不同浓度的盐酸环丙沙星后，所得的标准曲线的回归方程的数字见表1。在5支离心管中各加入1 mL浓度为0.5 mg/L的二氟沙星标准液和1 mL盐酸环丙沙星系列浓度标准液(0.001 mg/L～0.1 mg/L)。标准曲线在0.005 mg/L～0.1 mg/L的范围内线性良好，其回归曲线为Y＝2.000 2 X－0.017 3， r²＝0.999 4。最低检测限为0.005 mg/L。 

表1　乳汁中盐酸环丙沙星和二氟沙星标准曲线系列浓度

Table 1　The concentrations of standard curve of difloxacin and ciprofloxacin in milk